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                        肾脏标志物的新宠——中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)

                        武汉华美生物工程有限公司2019年5月22日 1:33 点击:120

                        据估计,目前全世界有8.5亿人因各种原因罹患肾脏疾病。慢性肾病(CKD)每年造成至少240万人死亡,目前是增长最快的第六大死因。


                        急性肾损伤(AKI)是CKD的重要驱动因素,全世界有1300多万人受其影响,其中85%发生在低收入和中等收入国家(LMICs)。此外,CKD和AKI是其他疾病和危险因素(包括心血管疾病、糖尿病、高血压、肥胖以及艾滋病毒、疟疾、结核病和肝炎等感染)发病率和死亡?#35797;?#21152;的重要因素。儿童CKD和AKI不仅会导致儿童时期的大量发病率和死亡率,还会导致儿童期以外的医疗问题。


                        在过去40年内,急性肾功能损伤的预测并没有显著进步。目前的诊断方法,如血清肌酐或胱蛋白酶?#31181;?#21058;C,只在肾功能恶化后才有所表达,而这可能在器官损伤1天以上才显现甚至仍不明显。因此以肌酐测定为基础的肾功能评价体系阻碍了AKI治疗的进展,需要?#37238;?#21152;敏感、特异的方法测定AKI肾功能的下降。


                        近年来,在临床和实验?#24050;?#31350;中发?#33267;?#19968;些新的、更加敏感的AKI生物标志物,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)就是其中重要代表之一,它不仅能在血清肌酐升高之前诊断AKI,而且能为AKI的病因诊断提供帮助。


                        与传统急性肾损伤标志物相比,NGAL具有很强的时效性,更高的灵敏性和特异性。

                        ClinJ Am Soc Nephrol. 2008 May; 3(3): 665–673. American Society of Nephrology


                        NGAL是小分子蛋白质,为脂质运载蛋白超家族成员,表达于肾小管上皮细胞、肝细胞、免疫细胞等。在肾缺血或肾毒性损害时NGAL显著上调,高表达于受损肾小管上皮细胞,特别是近端肾小管上皮细胞,促进上皮细胞再生,是一种缺血或肾毒性AKI的早期敏感并特异的生物标志物。


                        华美·科赛格从2015年8月推出NGAL多抗产品得到广泛认可后,经过精心研发,2016年3月又相继推出单抗产品,NGAL作为我司明星产品,一直广受青睐,目前已有不少试剂生产商采用我司的抗体转产。


                        NGAL临床应用项目优势


                        ● 监测时间早:NGAL可以在肾脏发生损伤2小时内就显著升高。血清肌酐、尿素氮需要1-3天才有明显升高;胱抑素C、微球蛋白需要在20小时左右有显著升高。

                        ● ?#23376;?#21028;断:NGAL提示值是正常样本含量的数百倍,这样可避免检验?#20302;?#35823;差造成临界值不?#38376;?#26029;的情况。

                        ● 特异性高:在单一研究中心的均质患者人群中,NGAL是特异性最好的预测AKI的指标。


                        --华美·科赛格NGAL诊断原料--


                        NGAL单克隆抗体

                        A. 化学发光平台

                        所有的单克隆抗体分别用作捕获抗体和标?#24378;?#20307;,组合成不同抗体对,用于双抗?#34892;?#27861;免疫检测。不同抗体对检测不同浓度的NGAL,进行四参数logistic拟合(图1),结果显示R2>0.99,配对组合理想。配对方式如下(捕获抗体-标?#24378;?#20307;):

                        MAb combination A: CSB-DA001DmN①-CSB-DA001AmN①

                        MAb combination B: CSB-DA001AmN①-CSB-DA001DmN①

                        MAb combination C: CSB-DA001AmN②-CSB-DA001DmN①

                        MAb combination D: CSB-DA001AmN③-CSB-DA001DmN①


                        图1. 不同NGAL抗体组合测NGAL的校准曲线


                        为验证抗体对适用于临?#24067;?#27979;,利?#27599;?#20307;对组合(A、B、C和D组合)对50例临床样本进行检测,并与?#24739;?#39640;质量的诊断试剂测值进行?#21592;齲?#26816;测结果如图2,此结果表明四种组合检测数据与比对试剂相关性较好。


                         

                        图2. 不同NGAL抗体组合应用于化学发光平台对临床样本的检测


                        B. 胶乳比浊平台

                        为验证抗体是否适用于胶乳增强免疫比浊法,将本公司的自产抗体制成胶乳比浊试剂和?#24739;?#39640;质量的诊断试剂同时对血清样本进行检测,两者相关性高达0.97(图3),说明本公司自产单抗适用于胶乳增强免疫比浊试剂。


                        图3. 自产抗体和比对试剂对血样的检测


                        C. 免疫荧光层析平台

                        为验证抗体是否适用于免疫荧光层析,将本公司的自产抗体对40例临床样本进行检测,并与?#24739;?#39640;质量的诊断试剂测值进行?#21592;齲?#26816;测结果如图4,检测数据与比对试剂相关性较好。


                        图4. NGAL抗体组合应用于免疫荧光层析平台对临床样本的检测


                        抗体热稳定性

                        将四种NGAL单克隆抗体置于-20℃、2-8℃和37℃,15天后测抗体的效价,从图5可以看出在2-8℃和37℃条件下抗体的效价与-20℃条件维持在?#27426;?#27700;平,说明?#27599;?#20307;稳定性好。


                         

                        图5. 四种NGAL单抗的稳定性测定


                        试剂热稳定性

                        将NGAL单抗于4℃和37℃分别放置7天,再分别?#21058;?#33267;胶乳颗粒,然后在同一条件?#24405;?#27979;不同浓度的NGAL校?#35745;罰?#32467;果如表1,37℃热处理的抗体相对于4℃存放,在检测性能方面变化很小,说明?#27599;?#20307;稳定性?#32454;瘛?/p>


                         

                        表1.不同温度处理后的单抗对NGAL检测的比较



                        NGAL多克隆抗体

                        利用外购高质量的比对试剂和本公司多抗制成胶乳试剂对50份随机样本进行检测,结果如下图6,两者相关系数高达0.98,表明本公司自产的多克隆抗体可以用于临?#24067;?#27979;试剂。


                        图6.自产多抗配制试剂与外购比对试剂对临床样本测值的比较(胶乳增强免疫比浊法)


                        多抗稳定性

                        将多抗(未加保护?#31890;?#32622;于37℃加热处理7天后,然后?#21058;?#33267;胶乳颗粒,制备成胶乳试?#31890;?#26816;测不同浓度下的NGAL校?#35745;罰?#19982;未加热处理组比较(表2)。结果显示两者偏差不大,说明多抗比较稳定。


                         

                        表2. 不同温度处理后的多抗对NGAL检测的比较


                        NGAL蛋白

                        科赛格同时还提供高质量的人NGAL蛋白,货号为CSB-DP001A 。该蛋白可用于免疫测试的校?#35745;貳?#20813;疫印迹(WB)等方面。


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                        (来源: 武汉华美生物工程有限公司


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